通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)細(xì)胞中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的細(xì)胞稱為細(xì)胞株。穩(wěn)定細(xì)胞株篩選一般是將外源DNA克隆到具有某種抗性或選擇基因的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到染色體中，用載體中所含的選擇標(biāo)志進(jìn)行篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株。西生物醫(yī)藥提供穩(wěn)定細(xì)胞株篩選服務(wù)。 肝細(xì)胞癌(HCC)是一種最常見的腫瘤，也是全球引發(fā)癌癥患者死亡的第3大原因。肝癌細(xì)胞株是通過克隆培養(yǎng)法或通過篩選培養(yǎng)法從肝癌病理組織中分離出單細(xì)胞后，由單個(gè)細(xì)胞不斷分裂增殖形成的細(xì)胞群，具有與原代組織極為相似的特性和人體完整的遺傳基因，并能穩(wěn)定傳代。人肝癌細(xì)胞株因其分離來(lái)源的親本患者不同故名稱各異，所以根據(jù)它的來(lái)源不同而命名的細(xì)胞株稱為人肝癌細(xì)胞系。
下面來(lái)對(duì)國(guó)內(nèi)較為常用的幾株人肝癌細(xì)胞系的特性、優(yōu)勢(shì)及其在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)行整理，為腫瘤學(xué)者實(shí)驗(yàn)研究提供參考。
1、 SMMC-7721人肝癌細(xì)胞株
SMMC-7721細(xì)胞系是于1977年建立，材料取自一名50歲男性原發(fā)性肝細(xì)胞癌HCC患者的手術(shù)切除標(biāo)本進(jìn)行體外培養(yǎng)而得。其生物學(xué)特性如下: 細(xì)胞系生長(zhǎng)較迅速穩(wěn)定，在原代細(xì)胞開始傳代階段增殖緩慢，以后趨于穩(wěn)定而迅速生長(zhǎng)；細(xì)胞形態(tài)為上皮樣；貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞的亞微結(jié)構(gòu)形態(tài)符合癌細(xì)胞的一般特征；甲胎蛋白(α-fetoprotein, AFP)免疫熒光染色呈陽(yáng)性；LDH同工酶譜的變化與肝癌細(xì)胞的一般特征一致；免疫缺陷小鼠體內(nèi)可成瘤率高，動(dòng)物異種后瘤結(jié)節(jié)經(jīng)病理切片檢查，其組織形態(tài)和原手術(shù)切除標(biāo)本類似。
2、Bel-7402人肝癌細(xì)胞株
Bel-7402于1974年建立，來(lái)源于一位53歲男性肝癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本，屬于HCC。生物學(xué)特性如下: 細(xì)胞增長(zhǎng)迅速而恒定，6-7 d可傳代1次；細(xì)胞形態(tài)以多邊形上皮樣占絕大多數(shù)；貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞染色體中有一大而長(zhǎng)的近端著絲點(diǎn)染色體，出現(xiàn)頻率高，是本株細(xì)胞的標(biāo)記染色體；AFP免疫熒光反應(yīng)陽(yáng)性；LDH、G6PD、TAT等酶代謝及細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)基本上保持臨床人體肝癌的特性；異種接種后成瘤率高，3-4 d可成瘤，瘤塊組織學(xué)病理與臨床HCC相近。
3、 MHCC97人肝癌細(xì)胞株
該細(xì)胞系由上海醫(yī)科大學(xué)中山醫(yī)院建立, 將一名我國(guó)39歲男性HCC患者的肝右葉轉(zhuǎn)移病灶的手術(shù)切除標(biāo)本接種于裸鼠肝內(nèi)建造出人肝癌裸鼠轉(zhuǎn)移模型(LCI-D20)而得。已證實(shí), 經(jīng)過再次分離得到的MHCC97H、MHCC97L及HCCLM3 3種細(xì)胞株，依據(jù)它們的轉(zhuǎn)移特點(diǎn)，雖來(lái)源同一父系，但具有異質(zhì)性，即具有不同的轉(zhuǎn)移潛能。
MHCC97人肝癌細(xì)胞系于1998年從裸鼠人肝癌轉(zhuǎn)移模型(LCI-D20)體外傳代培養(yǎng)獲得，該細(xì)胞系符合一般人惡性腫瘤的病理學(xué)和遺傳學(xué)特征，細(xì)胞呈上皮樣，貼壁生長(zhǎng)，血清HBsAg、AFP高表達(dá)，成瘤率高且優(yōu)先轉(zhuǎn)移的靶器官是肺，肺轉(zhuǎn)移率100%，故證實(shí)該細(xì)胞系為高轉(zhuǎn)移特性的人肝癌細(xì)胞系。
2001年，研究者從MHCC97細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)并分離出不同轉(zhuǎn)移潛能的2個(gè)細(xì)胞系MHCC97-H和MHCC97-L，前者肺轉(zhuǎn)移率100%，后者40%；從生長(zhǎng)速度上，前者細(xì)胞倍增時(shí)間較后者短；穿透人工基底膜能力前者較后者大； 前者均較后者活力強(qiáng)、代謝旺。傳代至20代后，兩種形態(tài)學(xué)特征及生長(zhǎng)速度方面均較穩(wěn)定。之后又從MHCC97-H裸鼠接種后成功得到更高轉(zhuǎn)移潛能的HCCLM3細(xì)胞系。
4、HepG2人肝母細(xì)胞瘤
1979年，從阿根廷一名15歲高加索男孩的原發(fā)性肝胚細(xì)胞瘤中分離出并建立, 該細(xì)胞系呈上皮樣; 貼壁抱團(tuán)生長(zhǎng); 生長(zhǎng)較快, 傳代周期為1-2d; 低轉(zhuǎn)移; 裸鼠中成瘤率較差; AFP陽(yáng)性; HBsAg陰性, 然而目前尚未證明該細(xì)胞中有乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)基因組; 但通過實(shí)驗(yàn)已證實(shí), 該細(xì)胞系分化程度較高, 細(xì)胞里代謝酶的生物轉(zhuǎn)化特性較完整, 不需加入外源性活化系統(tǒng)。在藥物作用相關(guān)研究中代謝酶保持穩(wěn)定, 不會(huì)因傳代次數(shù)增多而有所改變, 所含有的生物轉(zhuǎn)化代謝酶與人正常肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞同源, 因此, 常被用于體外肝細(xì)胞代謝或遺傳毒性試驗(yàn)方面的理想細(xì)胞系. 其中, HepG2.2.15是目前應(yīng)用較為廣泛的細(xì)胞株, 它是HepG2的衍生物是體外篩選抗HBV藥物的良好模型, 并用于抗HBV新藥開發(fā)的體外研究工具。
5、Hep3B人肝癌細(xì)胞株
Hep3B分離自8歲美國(guó)黑人男童的肝癌組織. 細(xì)胞形態(tài)跟HepG2類似, 呈上皮細(xì)胞, 電鏡下觀察胞漿里面很多粗大的黑顆粒, 同樣喜抱團(tuán)貼壁生長(zhǎng); 其在裸鼠中能致瘤, 但基本不轉(zhuǎn)移. HBV陽(yáng)性, 這與HepG2不同, 這株細(xì)胞整合了完整的HBV基因組，可用于HBV感染后發(fā)展致癌相關(guān)研究。
6、 Huh-7人肝癌細(xì)胞株
該細(xì)胞系于1982年從一名患有肝癌的57歲日本男性肝癌組織標(biāo)本上培養(yǎng)而得。該細(xì)胞AFP陽(yáng)性，高度分化, 細(xì)胞呈上皮樣, 貼壁生長(zhǎng). 特點(diǎn)是HBV陰性, 而具有丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)易感性，故可用于HCV與肝癌的關(guān)系的研究. 除了用于研究致癌性, 還用于基因表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制、新陳代謝及VLDL的分泌等. 此細(xì)胞系的特別之處如下: 可用于生產(chǎn)重組蛋白如促紅細(xì)胞生成素; 在蛋白質(zhì)生物學(xué)方面用于研究在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的登革病毒; 廣泛用于異種移植動(dòng)物模型.
7、 PLC/PRF/5人肝癌亞歷山大細(xì)胞
PLC/PRF/5人肝癌亞歷山大細(xì)胞于1976年建系, 細(xì)胞來(lái)自一位患有原發(fā)性HCC的莫桑比克男性患者的標(biāo)本; 為上皮樣貼壁生長(zhǎng); AFP陽(yáng)性, 不產(chǎn)生白蛋白; 分泌ad亞型的HBsAg而不產(chǎn)生HBcAg或HBeAg和Dane顆粒, 卻可維持HAV的繁殖; 該細(xì)胞可能含有全部HBV基因組, 同工酶譜及核型與人類同源; 裸鼠異種移植可致瘤. 此細(xì)胞系因其產(chǎn)生HBsAg的物理化學(xué)和免疫化學(xué)特性跟HBV攜帶者血清中HBsAg相似, 因此, 可被用來(lái)研究HBV體外病毒及其與原發(fā)性肝癌的關(guān)聯(lián), 抗HBV疫苗所需的HBsAg顆粒的制備及抗病毒藥物的制備等方面。
人肝癌細(xì)胞系具有以下優(yōu)點(diǎn)：
首先，在選擇實(shí)驗(yàn)對(duì)象的比較上，人肝癌細(xì)胞系相較于人原代肝細(xì)胞，克服了人原代肝細(xì)胞來(lái)源困難、實(shí)驗(yàn)難控制、存活時(shí)間短的局限，肝癌細(xì)胞系為已獲得的穩(wěn)定傳代的細(xì)胞，具有來(lái)源方便、操作簡(jiǎn)單、條件可控和可重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)，是用于肝癌疾病相關(guān)研究的理想對(duì)象。
其次，肝癌細(xì)胞系均選擇來(lái)源于確診肝癌患者的病理組織，具有與肝癌患者體內(nèi)相似的遺傳基因組，其發(fā)生發(fā)展機(jī)制、功能蛋白表達(dá)、病毒復(fù)制能力、侵襲轉(zhuǎn)移功能及抗藥性等，具有與人類親源體極其相近的特點(diǎn)，因此更適合應(yīng)用于肝癌各領(lǐng)域的研究.
